ELISA (enzýmový imunosorbent test) je široko používaný analytický biochémia, ktorý využíva protilátky a zmenu farieb na detekciu prítomnosti a množstva cieľového antigénu vo vzorke. Blokovací agenti hrajú v ELISA rozhodujúcu úlohu, pretože pomáhajú znižovať ne - špecifickú väzbu, čo môže viesť k falošne pozitívnym výsledkom a nepresným údajom. Ako dodávateľ ELISA sa ma často pýtajú na bežne používaných blokovacích agentov v ELISA. V tomto blogu predstavím niektoré z najčastejšie používaných agentov blokovania a ich vlastnosti.
1. Bovine sérové albumín (BSA)
Bovine Serum Albumin je jedným z najpopulárnejších agentov blokovania v Elise. Je to veľký guľový proteín, ktorý je relatívne lacný a ľahko dostupný. BSA funguje tým, že sa viaže na zostávajúce neobsadené miesta na povrchu mikroplatov po imobilizácii antigénu alebo protilátky. Tým sa bráni iným proteínom vo vzorke alebo detekčných činidlách z väzby, ktoré nie sú špeciálne na platničku.
BSA je kompatibilná so širokou škálou detekčných systémov, vrátane enzýmov konjugovaných a fluorescenčných protilátok. Môže sa používať v rôznych typoch ELISA, napríklad v priamom, nepriamom, sendvičovom a konkurenčnom ELISA. Typická koncentrácia BSA použitá na blokovanie je medzi 1% a 5% v roztoku pufra, ako je fosfátový tlmivý soľný roztok (PBS).
BSA však má určité obmedzenia. Niektoré vzorky môžu obsahovať protilátky proti BSA, čo môže viesť k falošne pozitívnym výsledkom. Okrem toho môže BSA interferovať s väzbou cieľového antigénu na protilátku, najmä ak má antigén vysokú afinitu k BSA.
2. Non - tukové suché mlieko
Non -tukové suché mlieko je ďalším bežne používaným blokovacím činidlom. Je to nákladová - účinná alternatíva k BSA a je bohatá na kazeín a iné proteíny. Proteíny v suchom mlieku bez tuku môžu účinne blokovať ne -špecifické väzbové miesta na mikroplate.
Non -tukové suché mlieko sa často používa pri koncentrácii 2% - 5% v roztoku tlmivého roztoku. Je vhodný pre mnoho aplikácií ELISA, ale neodporúča sa na použitie s testmi detekcie fosfoproteínu, pretože mliečne proteíny obsahujú fosfáty, ktoré môžu interferovať s detekciou fosforylovaných proteínov.
Jednou z výhod suchého mlieka bez tuku je to, že v niektorých testoch ELISA môže zvýšiť pomer signálu - k - k -. Môže však obsahovať proteázy, ktoré môžu degradovať protilátky alebo antigény v teste, najmä ak sa blok blokovania vykonáva na dlhšiu dobu pri teplote miestnosti.
3. Želatína
Želatína je proteín odvodený z kolagénu. Je to dobré blokovacie činidlo, pretože tvorí tenkú vrstvu na povrchu mikroplatov, ktorá môže zabrániť ne -špecifickej väzbe. Želatína sa často používa pri koncentrácii 0,1% - 1% v roztoku pufra.
Želatína je kompatibilná s mnohými detekčnými systémami a môže sa použiť v rôznych typoch ELISA. Je to obzvlášť užitočné v testoch, kde vzorka obsahuje vysokú koncentráciu proteínov, pretože môže znížiť šum pozadia spôsobený ne -špecifickými proteínovými proteínovými interakciami.
Želatína však nemusí byť v niektorých prípadoch taká účinná ako suché mlieko BSA alebo non -tuk, najmä ak má mikroplat vysokú väzbovú kapacitu. Ďalej je potrebné pripraviť želatínové roztoky čerstvé, pretože môžu v priebehu času podporovať rast mikroorganizmov.
4. Casein
Casein je hlavný proteín v mlieku. Môže sa použiť ako blokovacie činidlo buď vo forme čistého kazeínu alebo ako súčasť suchého mlieka bez tuku. Casein má vysokú afinitu k povrchu mikroplatov a môže účinne blokovať ne -špecifické väzbové miesta.
Kazeín sa často používa pri koncentrácii 1% - 2% v roztoku pufra. Je vhodný pre mnoho aplikácií ELISA, ale rovnako ako suché mlieko s tukom sa neodporúča na testy detekcie fosfoproteínu. Casein môže poskytnúť dobrú rovnováhu medzi efektívnosťou blokovania a efektívnosťou nákladov.
5. Blokovanie vyrovnávacích pamätí
K dispozícii sú tiež komerčne dostupné blokovacie vyrovnávače, ktoré sú formulované špeciálne pre ELISA. Tieto tlmivé roztoky často obsahujú kombináciu rôznych blokovacích činidiel, ako je BSA, kazeín a ďalšie prísady, aby poskytli optimálny výkon blokovania.
Komerčne dostupné blokovacie vyrovnávače sú vhodné na použitie, pretože sú predložené a pripravené na použitie. Môžu ušetriť čas a úsilie v laboratóriu. Niektoré blokovacie vyrovnávače sú tiež navrhnuté tak, aby boli kompatibilné so špecifickými detekčnými systémami alebo typmi ELISA.
Pri výbere blokovacieho agenta je potrebné zvážiť niekoľko faktorov. Patria sem typ ELISA, povaha vzorky, detekčný systém a náklady. Často je potrebné optimalizovať blokovací krok testovaním rôznych blokovacích činidiel a koncentrácií, aby sa dosiahli najlepšie výsledky.
Okrem použitia vhodného blokovacieho činidla ovplyvňuje aj výsledky testu kvalita zariadenia používaného v ELISA. NapríkladAutomatický procesor ELISAMôže automatizovať proces ELISA, znížiť ľudské chyby a zlepšiť reprodukovateľnosť testu. ATrepačka mikroplatíkmôže zabezpečiť rovnomerné miešanie reagencií, čo je rozhodujúce pre presné výsledky. AČítačka mikroplatík ELISAsa používa na meranie absorbancie alebo fluorescencie vzoriek a poskytuje kvantitatívne údaje pre test.
Ako dodávateľ ELISA ponúkame širokú škálu vysoko kvalitných blokovacích agentov, ako aj potrebné vybavenie pre ELISA. Naše výrobky sú navrhnuté tak, aby vyhovovali potrebám rôznych laboratórií a výskumných projektov. Ak máte záujem o nákup našich produktov ELISA alebo máte nejaké otázky týkajúce sa ELISA, neváhajte nás kontaktovať kvôli obstarávaniu a rokovaniam. Zaviazali sme sa, že vám poskytuje najlepšie produkty a služby na podporu vášho výskumu.
Odkazy
- Harlow, E., & Lane, D. (1988). Protilátky: laboratórna príručka. Cold Spring Harbour Laboratory Press.
- Voller, A., Bidwell, De a Bartlett, A. (1979). Immunosorbentový test spojený s enzýmom (ELISA). Dynatech Laboratories.
- Crowther, Jr (2001). Sprievodca ELISA. Humana Press.